Cas12a 核酸酶 (CRISPR-associated endonuclease Cas12a)

一、简介

Cas12a（又称Cpf1）是依赖于crRNA介导的2类V型CRISPR效应蛋白，是一种由单向导RNA（crRNA）引导的位点特异性DNA核酸内切酶。

与广泛使用的Cas9系统相比，Cas12a具有以下独特性质：

（1）单向导RNA：不需要tracrRNA，仅由单个crRNA即可引导。

（2）独特的PAM识别：识别富含胸腺嘧啶（T）的PAM序列（如5'-TTN-3'或5'-TTTV-3'，V=A/C/G），与Cas9需要富含G的PAM相反。

（3）低脱靶效应：相比于Cas9蛋白，Cas12a具有类似的基因组编辑效率，但脱靶效率更低。

（4）产生粘性末端：切割靶标双链DNA后产生粘性末端，有利于基因的精确编辑。

（5）反式切割活性：与靶标DNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性（附属切割活性）被激活，可切割体系中的单链DNA报告探针。

二、产品信息

1、酶活：与同类型产品对比

2、规格

产品	Cas12a 核酸酶
来源
分子量	147.9kDa
形态	无色透明液体
浓度	44.43 nmol/ml
规格	44.43nmol/支
纯度
保存液	40mM Tris，300mM NaCl，5%甘油，pH7.5;
失活	65℃加热10min失活。

三、储存条件与有效期

（1）储存温度：-20℃保存；长期储存建议置于-80℃。

  （2）有效期：在-20℃条件下可保存1年。

  （3）注意事项：建议根据使用次数进行分装，避免反复冻融。

四、使用方法

将 Cas12a、gRNA、底物 DNA 置于冰浴上，使用无核酸酶水稀释gRNA至300nM，底物DNA至30nM。

2．反应体系(以 30μl 体系为例)：

3．用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。25℃

预孵育 10min。

4．加入3ul 30nM底物靶 DNA ( 30ul 最终体积)，轻轻混匀(用移液器轻轻吹打混匀或用涡

旋混合器在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体，37℃孵育 10min。

5．向每个样品中加入1ul蛋白酶 K ，轻轻混匀， 室温孵育 10min。

6．向反应体系中加入6ul DNA上样缓冲液(6X) ，然后使用 1%琼脂糖凝胶进行电泳分析。

 注意事项

1．本产品使用过程中需要确保 Nuclease-free，操作时应特别小心，避免被污染。所有操作都需要按照 RNase-free 的要求进行。

2．本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品， 不得存放于普通住宅内。

3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。