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重组技术

TEV蛋白酶

产品简介:TEV Protease(TEV 酶 )是来源于烟草蚀纹病毒 (TEV) 的重组蛋白酶,经改造后与天然TEV酶相比其稳定性更好,常被用来切除纯化后融合蛋白的亲和标签。TEV酶具有很强的位点特异性,能够识别EXXYXQ (G/S) 的七氨基酸序列,最常用的是ENLYFQG,其切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸或丝氨酸之间。蛋白酶在G/S(或P1)位点切割多种氨基酸序列,为切割后的融合部分提供一个想要的N端氨基酸。此蛋白酶该酶在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性,但在pH 6.0-8.5和4-30℃的广泛范围内TEV酶皆有活性,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而修改。

重组TEV酶N端带有His标签,使得溶液状态酶切反应完后,可以通过亲和层析去除。当进行柱酶切时,则可以将目的蛋白从固定在树脂上的融合蛋白上直接切下。

影响天然TEV酶活性的常见因素:

1)PMSF和AEBSF(1 mM),TLCK(1 mM),Bestatin(1 mg/ml)、Pestatin A(1 mM),EDTA(1 mM)以及E-64(3 mg/ml),以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响;

2)Zn离子(>5 mM)对rTEV活性有抑制;

3)与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。

储存条件

-20℃保存,于-20 ~ 0℃运输。有效期为24 个月。长期保存建议放-80℃。▲避免反复冻融。

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